Extracção de ADN é um procedimento de rotina utilizado para isolar o ADN do núcleo das células.
p> Os cientistas podem comprar kits de extracção de ADN prontos a usar. Estes kits ajudam a extrair ADN de determinados tipos de células ou tipos de amostras. Contudo, podem ser caros de utilizar rotineiramente, por isso muitos laboratórios têm os seus próprios métodos de extracção de ADN
O que envolve a extracção de ADN?
Passo 1. Quebrar células para libertar o ADN
As células de uma amostra são separadas umas das outras, muitas vezes por um meio físico como moagem ou vórtice, e colocadas numa solução contendo sal. Os iões de sódio carregados positivamente no sal ajudam a proteger os grupos de fosfato carregados negativamente que correm ao longo da espinha dorsal do ADN.
Um detergente é então adicionado. O detergente decompõe os lípidos na membrana celular e nos núcleos. O ADN é libertado à medida que estas membranas são perturbadas.
Passo 2. Separar o ADN das proteínas e outros resíduos celulares
Para obter uma amostra limpa de ADN, é necessário remover o máximo possível dos resíduos celulares. Isto pode ser feito através de uma variedade de métodos. Muitas vezes adiciona-se uma protease (enzima proteica) para degradar as proteínas associadas ao ADN e outras proteínas celulares. Alternativamente, alguns dos detritos celulares podem ser removidos filtrando a amostra.
Passo 3. Precipitando o ADN com um álcool
Finalmente, o álcool gelado (etanol ou isopropanol) é cuidadosamente adicionado à amostra de ADN. O ADN é solúvel em água mas insolúvel na presença de sal e álcool. Agitando suavemente a camada de álcool com uma pipeta esterilizada, um precipitado torna-se visível e pode ser retirado. Se houver muito ADN, pode ver-se um precipitado branco, filamentoso.
Passo 4. Limpeza do ADN
A amostra de ADN pode agora ser mais purificada (limpa). É então ressuspendida num tampão ligeiramente alcalino e pronta a usar.
Passo 5. Confirmando a presença e qualidade do ADN
Para mais trabalho de laboratório, é importante conhecer a concentração e qualidade do ADN.
Leituras de densidade óptica obtidas por um espectrofotómetro podem ser utilizadas para determinar a concentração e pureza do ADN numa amostra. Em alternativa, a electroforese em gel pode ser utilizada para mostrar a presença de ADN na amostra e dar uma indicação da sua qualidade.
Para que pode este ADN ser utilizado?
Após extracção, o ADN pode ser utilizado para análises moleculares incluindo PCR, electroforese, sequenciação, impressão digital e clonagem.