Laatst Bijgewerkt op 5 mei 2020 door Sagar Aryal
Waarop wordt de Biurettest getest?
Proteïnen zijn de complexe verbinding die wordt gevormd door duizenden aminozuren. Aminozuren zijn amfotere elektrolyten met carboxyl- en aminogroepen die zich gedragen als zuur en base. Het heeft één positieve lading en één negatieve lading, vandaar dat deze ionen elektrisch neutraal zijn en niet migreren in het elektrische veld. De twee aminozuren worden aan elkaar gekoppeld met behulp van een binding die peptidebinding wordt genoemd en zo ontstaat dipeptide. De binding wordt gevormd tussen de α-aminogroep van het ene aminozuur en de α-carboxylgroep van een ander aminozuur door verwijdering van een watermolecuul. De vorming van de peptidebinding wordt de condensatiereactie genoemd. Evenzo worden drie aminozuren die met elkaar verbonden zijn door twee peptidebindingen tripeptide genoemd, en als de keten zich uitstrekt, wordt het een polypeptide genoemd. Biureet is een verbinding die wordt gevormd door verhitting van ureum tot 1800, waardoor 2 moleculen ureum condenseren. De peptidebindingen in Biuret geven een positief resultaat voor de test, vandaar dat het reagens zo wordt genoemd. Het wordt beschouwd als een algemene test voor verbindingen (eiwitten en peptiden) met twee of meer peptide (CO-NH) bindingen.
Doelstellingen
- Het eiwit in de gegeven oplossing detecteren.
- De aanwezigheid van de peptidebinding aantonen.
Biurettest-principe (Hoe werkt de biurettest?)
Een biurettest is een chemische test die wordt gebruikt om de aanwezigheid van een peptidebinding in een stof te bepalen. Hij is gebaseerd op de biuretreactie waarbij een peptidestructuur die ten minste twee peptideverbindingen bevat, een violette kleur produceert wanneer hij met alkalisch kopersulfaat wordt behandeld. In aanwezigheid van een alkalische oplossing kan het blauwgekleurde koper II-ion een complex vormen met de peptidebindingen, aangezien het peptide beschikt over ongedeelde elektronenparen in stikstof en zuurstof van water. Het gekleurde coördinatiecomplex wordt gevormd tussen het Cu2+ -ion en de carbonylzuurstof (>C=O) en de amidestikstof (=NH) van de peptidebinding. Zodra dit complex is gevormd, verandert de oplossing van blauw in paars. Hoe dieper de paarse kleur, des te hoger is het aantal peptide-kopercomplexen. De reactie vindt plaats in elke verbinding die ten minste twee H2N-C, H2N-CH2-, H2N-CS- of soortgelijke groepen bevat die rechtstreeks of via een koolstof- of stikstofatoom met elkaar verbonden zijn. Eén koperion is waarschijnlijk via coördinaatbindingen verbonden met 6 nabijgelegen peptidebindingen. De intensiteit van de kleur is recht evenredig met het aantal peptidebindingen in het reagerende eiwitmolecuul en met het aantal eiwitmoleculen in het reactiesysteem.
Het Biuret-reagens is een oplossing van natriumhydroxide (NaOH) of kaliumhydroxide (KOH), gehydrateerd koper(II)sulfaat en kaliumnatriumtartraat. Natriumhydroxide en kaliumhydroxide zorgen voor het alkalische medium en kaliumnatriumtartraat wordt toegevoegd om de koperionen in de oplossing te chelaten en dus te stabiliseren of om hun oplosbaarheid in een alkalische oplossing te behouden.
Biuretproef
- Neem 3 schone en droge reageerbuizen.
- Voeg 1-2 ml van de testoplossing, ei-albumine, en gedeïoniseerd water in de respectieve reageerbuizen.
- Voeg 1-2 ml Biuretreagens toe aan alle reageerbuizen.
- Schud goed en laat de mengsels 5 minuten staan.
- Observeer op eventuele kleurverandering.
Biurettestresultaten
Observatie |
Interpretatie |
| Geen kleurverandering, i.e., de oplossing blijft blauw | Eiwitten zijn afwezig (negatieve biurettest) |
| De oplossing verandert van blauw naar dieppaars | Eiwitten zijn aanwezig (positieve biurettest) |
Biurettest toepassingen
- Het kan worden gebruikt om de hoeveelheid eiwit in de urine op te sporen.
- Biuretreactie met eiwit is toepasbaar voor de kwantitatieve bepaling van totaal eiwit door spectrofotometrische analyse.
- Shrestha B (2002). Praktische biochemie en biotechnologie. Eerste druk. 99933-665-1-X.
- Chemistry Learner (https://www.chemistrylearner.com/biuret-test.html).
- Satyanarayana U en Chakrapani U (2006). Biochemie. Uppala Auteur-Uitgever Interlink. Derde editie. Pagina nr. 43-67.
- https://study.com/academy/lesson/what-does-biuret-test-for-method-equation.html.
Internetbronnen
- 2% – https://www.slideshare.net/jammalavamsikrishna/amino-acids-71579203
- 2% – https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/biuret
- 2% – https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/biuret
- 2% – https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0009898175903514
- 2% – https://peptidesciences.com/information/peptide-bonds/
- 10% – https://onlinesciencenotes.com/biuret-test-principle-requirements-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://peptidesciences.com/information/peptide-bonds/
- 10% – https://onlinesciencenotes.com/biuret-test-principle-requirements-procedure-and-result-interpretation/https://quizlet.com/18722031/biology-chapter-5-flash-cards/
- 1% – https://microbiologyinfo.com/benedicts-test-principle-composition-preparation-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://brainly.in/question/716138
- 1% – http://amrita.olabs.edu.in/?sub=79&brch=17&sim=205&cnt=1
- <https://education.jlab.org/qa/charges_01.html