最終更新日：2020年5月5日 by Sagar Aryal
ビウレットテストでは何を調べるのか？
タンパク質は何千ものアミノ酸が集まってできた複合化合物です。 アミノ酸はカルボキシル基とアミノ基を持つ両性電解質で、酸と塩基のような働きをします。 このイオンは正と負の電荷を持ち、電気的に中性で、電界中を移動することはありません。 2つのアミノ酸がペプチド結合と呼ばれる結合の助けを借りて結合すると、ジペプチドができる。 ペプチド結合は、1つのアミノ酸のαアミノ基と、もう1つのアミノ酸のαカルボキシル基の間に、水分子を取り除いて形成される。 ペプチド結合の形成は、縮合反応と呼ばれる。 同様に、3つのアミノ酸が2つのペプチド結合で結ばれたものをトリペプチドと呼び、鎖が伸びるとポリペプチドと呼ばれる。 ビウレットは、尿素を1800℃で加熱すると、2分子の尿素が縮合してできる化合物である。 ビウレットに含まれるペプチド結合が検査結果を陽性にすることから、この試薬にはそのような名前が付けられている。
目的
- 与えられた溶液中のタンパク質を検出する。
- ペプチド結合の存在を示す。
ビウレットテストの原理（ビウレットテストの仕組み）
ビウレットテストは、物質中のペプチド結合の存在を判定するために用いられる化学的なテストです。 ビウレット反応とは、少なくとも2つのペプチド結合を持つペプチド構造を、アルカリ性の硫酸銅で処理すると紫色に発色する反応のことです。 ペプチドは水の窒素と酸素に非共有電子対を持っているため、アルカリ溶液の存在下では、青色の銅IIイオンがペプチド結合と錯体を形成する。 このとき、銅2+イオンとペプチド結合のカルボニル酸素（>C=O）およびアミド窒素（=NH）との間で着色された配位錯体が形成される。 この複合体が形成されると、溶液は青から紫に変わります。 紫色が濃くなるほど、ペプチドと銅の複合体の数が多いことを意味する。 この反応は、少なくとも2つのH2N-C、H2N-CH2-、H2N-CS-などの基が、直接または炭素原子や窒素原子を介して結合している化合物であれば、どのようなものでも起こる。 1つの銅イオンは、おそらく近くの6つのペプチド結合と共役結合で結ばれている。 色の強さは、反応しているタンパク質分子に存在するペプチド結合の数に直接比例し、また、反応系に存在するタンパク質分子の数にも比例する。
ビウレット試薬は、水酸化ナトリウム（NaOH）または水酸化カリウム（KOH）、水和した硫酸銅（II）、酒石酸ナトリウムカリウムからなる溶液である。 水酸化ナトリウムや水酸化カリウムはアルカリ性媒体となり、酒石酸ナトリウムカリウムは溶液中の銅イオンをキレート化して安定化させるため、あるいはアルカリ性溶液への溶解性を維持するために添加されます。
ビウレット試験の手順
- 清潔で乾燥した試験管を3本用意する
- 試験液、卵アルブミン、脱イオン水をそれぞれの試験管に1～2mlずつ入れる
- すべての試験管にビウレット試薬を1～2ml入れる
- よく振ってから5分間放置する。
- 色の変化を観察する。
。
ビウレットテストの結果
観察 |
解釈 |
| 色の変化はありません。 i.e., | |
| 色の変化はなく、溶液は青色のままです | タンパク質は存在しません（ビウレットテスト陰性） |
| 溶液は青色から濃い紫色に変わります | タンパク質は存在します（ビウレットテスト陽性 |
ビウレットテストの用途
- 尿中のタンパク質の量を検出するために使用することができます。
- 蛋白質とのビウレット反応は、分光光度法による総蛋白質の定量に適用できます。
- Shrestha B (2002). 実用生化学・バイオテクノロジー. 初版。 99933-665-1-X.
- Chemistry Learner（https://www.chemistrylearner.com/biuret-test.html）.
- Satyanarayana U and Chakrapani U (2006). 生化学. ウッパラ著者出版社インターリンク。 第3版。 ページNo. 43-67.
- https://study.com/academy/lesson/what-does-biuret-test-for-method-equation.html.
インターネットの情報源
- 2% – https://www.slideshare.net/jammalavamsikrishna/amino-acids-71579203
- 2% – https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/biuret
- 2%. – https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0009898175903514
- 2% – https://peptidesciences.com/information/peptide-bonds/
- 10% – https://onlinesciencenotes.com/biuret-test-principle-requirements-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – div https://quizlet.com/18722031/biology-chapter-5-flash-cards/
- 1% – https://microbiologyinfo.com/benedicts-test-principle-composition-preparation-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://brainly.in/question/716138
- 1% – http://amrita.olabs.edu.in/?sub=79&brch=17&sim=205&cnt=1
- <https://education.jlab.org/qa/charges_01.html