Ultimo aggiornamento del 5 maggio 2020 di Sagar Aryal
Cosa indica il test del biureto?
Le proteine sono il complesso composto formato da migliaia di aminoacidi. Gli aminoacidi sono elettroliti anfoteri che hanno gruppi carbossilici e amminici che agiscono come acido e base. Hanno una carica positiva e una negativa, quindi questi ioni sono elettricamente neutri e non migrano nel campo elettrico. I due amminoacidi sono legati insieme con l’aiuto di un legame chiamato legame peptidico e si ottiene il dipeptide. Il legame si forma tra il gruppo amminico α di un aminoacido e il gruppo carbossilico α di un altro aminoacido con la rimozione di una molecola d’acqua. La formazione del legame peptidico è detta reazione di condensazione. Allo stesso modo, tre amminoacidi legati insieme da due legami peptidici sono chiamati tripeptidi, e quando la catena si allunga, è chiamata polipeptide. Il biureto è un composto formato dal riscaldamento dell’urea a 1800 che provoca la condensazione di 2 molecole di urea. I legami peptidici nel Biureto danno un risultato positivo per il test, quindi il reagente è chiamato così. È considerato un test generale per i composti (proteine e peptidi) che hanno due o più legami peptidici (CO-NH).
Obiettivi
- Rilevare la proteina nella soluzione data.
- Dimostrare la presenza del legame peptidico.
Principio del test del biureto (Come funziona il test del biureto?)
Un test del biureto è un test chimico utilizzato per determinare la presenza di un legame peptidico in una sostanza. Si basa sulla reazione del biureto in cui una struttura peptidica contenente almeno due legami peptidici produce un colore viola quando viene trattata con solfato di rame alcalino. In presenza di una soluzione alcalina, lo ione rame II di colore blu può formare un complesso con i legami peptidici poiché il peptide ha coppie di elettroni non condivise in azoto e ossigeno dell’acqua. Il complesso di coordinazione colorato si forma tra lo ione Cu2+ e l’ossigeno carbonilico (>C=O) e l’azoto ammidico (=NH) del legame peptidico. Una volta che questo complesso si è formato, la soluzione passa dal blu al viola. Più profondo è il colore viola, più alto è il numero di complessi peptide-rame. La reazione avviene in qualsiasi composto contenente almeno due gruppi H2N-C, H2N-CH2-, H2N-CS- o simili, uniti direttamente o attraverso un atomo di carbonio o di azoto. Uno ione rame è probabilmente legato a 6 legami peptidici vicini da legami coordinati. L’intensità del colore è direttamente proporzionale al numero dei legami peptidici presenti nella molecola proteica che sta reagendo e anche al numero delle molecole proteiche presenti nel sistema di reazione.
Il reagente Biuret è una soluzione composta da idrossido di sodio (NaOH) o idrossido di potassio (KOH), solfato idrato di rame (II) e tartrato di sodio e potassio. L’idrossido di sodio e l’idrossido di potassio forniscono il mezzo alcalino e il tartrato di sodio e potassio viene aggiunto per chelare e quindi stabilizzare gli ioni rameici nella soluzione o per mantenere la loro solubilità nella soluzione alcalina.
Procedura del Test del Biureto
- Prendi 3 provette pulite e asciutte.
- Aggiungi 1-2 ml di soluzione di test, albumina d’uovo, e acqua deionizzata nelle rispettive provette.
- Aggiungi 1-2 ml di reagente Biureto in tutte le provette.
- Ascolta bene e lascia riposare le miscele per 5 minuti.
- Osserva eventuali cambiamenti di colore.
Risultati del test del biureto
Osservazione |
Interpretazione |
| Nessun cambiamento di colore, i.e., la soluzione rimane blu | Le proteine sono assenti (test del biureto negativo) |
| La soluzione passa dal blu al viola scuro | Le proteine sono presenti (test del biureto positivo) |
Usi del test del biureto
- Può essere utilizzato per rilevare la quantità di proteine nelle urine.
- La reazione del Biureto con le proteine è applicabile alla determinazione quantitativa delle proteine totali mediante analisi spettrofotometrica.
- Shrestha B (2002). Biochimica pratica e biotecnologia. Prima edizione. 99933-665-1-X.
- Chemistry Learner (https://www.chemistrylearner.com/biuret-test.html).
- Satyanarayana U e Chakrapani U (2006). Biochimica. Uppala Author-Publisher Interlink. Terza edizione. Pagina no. 43-67.
- https://study.com/academy/lesson/what-does-biuret-test-for-method-equation.html.
Fonti Internet
- 2% – https://www.slideshare.net/jammalavamsikrishna/amino-acids-71579203
- 2% – https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/biuret
- 2% – https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0009898175903514
- 2% – https://peptidesciences.com/information/peptide-bonds/
- 10% – https://onlinesciencenotes.com/biuret-test-principle-requirements-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://quizlet.com/18722031/biology-chapter-5-flash-cards/
- 1% – https://microbiologyinfo.com/benedicts-test-principle-composition-preparation-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://brainly.in/question/716138
- 1% – http://amrita.olabs.edu.in/?sub=79&brch=17&sim=205&cnt=1
- <https://education.jlab.org/qa/charges_01.html