Dernière mise à jour le 5 mai 2020 par Sagar Aryal
Que cherche le test de Biuret ?
Les protéines sont le composé complexe formé par des milliers d’acides aminés. Les acides aminés sont des électrolytes amphotères ayant des groupes carboxyle et amino qui agissent comme un acide et une base. Ils ont une charge positive et une charge négative, ces ions sont donc électriquement neutres et ne migrent pas dans le champ électrique. Les deux acides aminés sont liés entre eux à l’aide d’une liaison appelée liaison peptidique, ce qui donne un dipeptide. La liaison est formée entre le groupe α amino d’un acide aminé et le groupe α carboxyle d’un autre acide aminé avec l’élimination d’une molécule d’eau. La formation de la liaison peptidique est appelée réaction de condensation. De même, trois acides aminés liés entre eux par deux liaisons peptidiques sont appelés tripeptide, et lorsque la chaîne s’allonge, elle est appelée polypeptide. Le biuret est un composé formé en chauffant l’urée à 1800, ce qui entraîne la condensation de 2 molécules d’urée. Les liaisons peptidiques du Biuret donnent un résultat positif au test, d’où le nom du réactif. Il est considéré comme un test général pour les composés (protéines et peptides) ayant deux ou plusieurs liaisons peptidiques (CO-NH).
Objectifs
- Détecter la protéine dans la solution donnée.
- Mettre en évidence la présence de la liaison peptidique.
Principe du test de Biuret (Comment fonctionne le test de Biuret ?)
Le test de Biuret est un test chimique utilisé pour déterminer la présence d’une liaison peptidique dans une substance. Il est basé sur la réaction de Biuret dans laquelle une structure peptidique contenant au moins deux liaisons peptidiques produit une couleur violette lorsqu’elle est traitée avec du sulfate de cuivre alcalin. En présence d’une solution alcaline, l’ion cuivre II de couleur bleue peut former un complexe avec les liaisons peptidiques puisque le peptide possède des paires d’électrons non partagées dans l’azote et l’oxygène de l’eau. Le complexe de coordination coloré se forme entre l’ion Cu2+ et l’oxygène carbonyle (>C=O) et l’azote amide (=NH) de la liaison peptidique. Une fois ce complexe formé, la solution passe du bleu au violet. Plus la couleur violette est profonde, plus le nombre de complexes peptide-cuivre est élevé. La réaction se produit dans tout composé contenant au moins deux groupes H2N-C, H2N-CH2-, H2N-CS- ou similaires reliés entre eux directement ou par un atome de carbone ou d’azote. Un ion de cuivre est probablement lié à 6 liaisons peptidiques voisines par des liaisons de coordination. L’intensité de la couleur est directement proportionnelle au nombre de liaisons peptidiques présentes dans la molécule de protéine qui réagit et aussi au nombre de molécules de protéines présentes dans le système réactionnel.
Le réactif de Biuret est une solution composée d’hydroxyde de sodium (NaOH) ou d’hydroxyde de potassium (KOH), de sulfate de cuivre (II) hydraté et de tartrate de sodium et de potassium. L’hydroxyde de sodium et l’hydroxyde de potassium fournissent le milieu alcalin et le tartrate de sodium et de potassium est ajouté pour chélater et ainsi stabiliser les ions cuivriques dans la solution ou pour maintenir leur solubilité dans la solution alcaline.
Procédure du test de Biuret
- Prenez 3 tubes à essai propres et secs.
- Ajoutez 1 à 2 ml de la solution à tester, d’albumine d’œuf et d’eau déminéralisée dans les tubes à essai respectifs.
- Ajoutez 1 à 2 ml de réactif de Biuret dans tous les tubes à essai.
- Bien agiter et laisser reposer les mélanges pendant 5 minutes.
- Observer tout changement de couleur.
Résultats du test de Biuret
Observation |
Interprétation |
| Aucun changement de couleur, i.e., la solution reste bleue | Les protéines sont absentes (test de biuret négatif) |
| La solution passe du bleu au violet profond | Les protéines sont présentes (test du biuret positif) |
Test du biuret Utilisations
- Il peut être utilisé pour détecter la quantité de protéines dans l’urine.
- La réaction de biuret avec les protéines est applicable à la détermination quantitative des protéines totales par analyse spectrophotométrique.
- Shrestha B (2002). Biochimie pratique et biotechnologie. Première édition. 99933-665-1-X.
- Chemistry Learner (https://www.chemistrylearner.com/biuret-test.html).
- Satyanarayana U et Chakrapani U (2006). Biochimie. Uppala Author-Publisher Interlink. Troisième édition. Page no. 43-67.
- https://study.com/academy/lesson/what-does-biuret-test-for-method-equation.html.
Sources Internet
- 2% – https://www.slideshare.net/jammalavamsikrishna/amino-acids-71579203
- 2% – https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/biuret
- 2%. – https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0009898175903514
- 2% – https://peptidesciences.com/information/peptide-bonds/
- 10% – https://onlinesciencenotes.com/biuret-test-principle-requirements-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://quizlet.com/18722031/biology-chapter-5-flash-cards/
- 1% – https://microbiologyinfo.com/benedicts-test-principle-composition-preparation-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://brainly.in/question/716138
- 1% – http://amrita.olabs.edu.in/?sub=79&brch=17&sim=205&cnt=1
- <https://education.jlab.org/qa/charges_01.html
.