Les scientifiques peuvent acheter des kits d’extraction d’ADN prêts à l’emploi. Ces kits permettent d’extraire l’ADN de types de cellules ou d’échantillons particuliers. Cependant, ils peuvent être coûteux à utiliser en routine, de sorte que de nombreux laboratoires ont leurs propres méthodes d’extraction de l’ADN
Qu’implique l’extraction de l’ADN ?
Étape 1. Briser les cellules pour libérer l’ADN
Les cellules d’un échantillon sont séparées les unes des autres, souvent par un moyen physique comme le broyage ou le vortex, et mises dans une solution contenant du sel. Les ions sodium chargés positivement dans le sel aident à protéger les groupes phosphate chargés négativement qui courent le long du squelette de l’ADN.
On ajoute ensuite un détergent. Le détergent décompose les lipides de la membrane cellulaire et des noyaux. L’ADN est libéré au fur et à mesure que ces membranes sont perturbées.
Etape 2. Séparer l’ADN des protéines et des autres débris cellulaires
Pour obtenir un échantillon propre d’ADN, il est nécessaire d’éliminer autant de débris cellulaires que possible. Cela peut être fait par différentes méthodes. Souvent, une protéase ( enzyme protéique) est ajoutée pour dégrader les protéines associées à l’ADN et les autres protéines cellulaires. On peut aussi éliminer une partie des débris cellulaires en filtrant l’échantillon.
Étape 3. Précipitation de l’ADN avec un alcool
Enfin, de l’alcool glacé (soit de l’éthanol ou de l’isopropanol) est soigneusement ajouté à l’échantillon d’ADN. L’ADN est soluble dans l’eau mais insoluble en présence de sel et d’alcool. En remuant doucement la couche d’alcool avec une pipette stérile, un précipité devient visible et peut être extrait à la cuillère. S’il y a beaucoup d’ADN, vous pouvez voir un précipité filandreux et blanc.
Etape 4. Nettoyage de l’ADN
L’échantillon d’ADN peut maintenant être davantage purifié (nettoyé). Il est alors remis en suspension dans un tampon légèrement alcalin et prêt à être utilisé.
Etape 5. Confirmation de la présence et de la qualité de l’ADN
Pour d’autres travaux de laboratoire, il est important de connaître la concentration et la qualité de l’ADN.
Les lectures de densité optique prises par un spectrophotomètre peuvent être utilisées pour déterminer la concentration et la pureté de l’ADN dans un échantillon. Alternativement, l’électrophorèse sur gel peut être utilisée pour montrer la présence d’ADN dans votre échantillon et donner une indication de sa qualité.
À quoi peut servir cet ADN ?
Une fois extrait, l’ADN peut être utilisé pour des analyses moléculaires, notamment la PCR, l’électrophorèse, le séquençage, l’empreinte digitale et le clonage.