Última actualización el 5 de mayo de 2020 por Sagar Aryal
¿Para qué sirve la prueba de Biuret?
Las proteínas son el complejo compuesto formado por miles de aminoácidos. Los aminoácidos son electrolitos anfóteros que tienen grupos carboxilo y amino que actúan como ácido y base. Tienen una carga positiva y otra negativa, por lo que estos iones son eléctricamente neutros y no migran en el campo eléctrico. Los dos aminoácidos se unen con la ayuda de un enlace llamado enlace peptídico y se obtiene el dipéptido. El enlace se forma entre el grupo α amino de un aminoácido y el grupo α carboxilo de otro aminoácido con la eliminación de una molécula de agua. La formación del enlace peptídico se denomina reacción de condensación. Del mismo modo, tres aminoácidos unidos por dos enlaces peptídicos se denominan tripéptidos y, al alargarse la cadena, se denomina polipéptido. El Biuret es un compuesto formado por el calentamiento de la urea a 1.800 que da lugar a la condensación de 2 moléculas de urea. Los enlaces peptídicos del Biuret dan un resultado positivo en la prueba, de ahí que el reactivo se llame así. Se considera una prueba general para compuestos (proteínas y péptidos) que tienen dos o más enlaces peptídicos (CO-NH).
Objetivos
- Detectar la proteína en la solución dada.
- Demostrar la presencia del enlace peptídico.
Principio de la prueba de Biuret (¿Cómo funciona la prueba de Biuret?)
Una prueba de Biuret es una prueba química utilizada para determinar la presencia de un enlace peptídico en una sustancia. Se basa en la reacción de Biuret, en la que una estructura peptídica que contiene al menos dos enlaces peptídicos produce un color violeta cuando se trata con sulfato de cobre alcalino. En presencia de una solución alcalina, el ion cobre II de color azul puede formar un complejo con los enlaces peptídicos, ya que el péptido tiene pares de electrones no compartidos en el nitrógeno y el oxígeno del agua. El complejo de coordinación coloreado se forma entre el ion Cu2+ y el oxígeno carbonilo (>C=O) y el nitrógeno amida (=NH) del enlace peptídico. Una vez formado este complejo, la solución pasa de azul a púrpura. Cuanto más profundo sea el color púrpura, mayor será el número de complejos péptido-cobre. La reacción se produce en cualquier compuesto que contenga al menos dos grupos H2N-C, H2N-CH2-, H2N-CS- o similares unidos directamente o a través de un átomo de carbono o nitrógeno. Un ion de cobre está probablemente unido a 6 enlaces peptídicos cercanos mediante enlaces de coordinación. La intensidad del color es directamente proporcional al número de los enlaces peptídicos presentes en la molécula de proteína que está reaccionando y también al número de las moléculas de proteína presentes en el sistema de reacción.
El reactivo de Biuret es una solución compuesta por hidróxido de sodio (NaOH) o hidróxido de potasio (KOH), sulfato de cobre (II) hidratado y tartrato de sodio de potasio. El hidróxido de sodio y el hidróxido de potasio proporcionan el medio alcalino y el tartrato sódico de potasio se añade para quelar y así estabilizar los iones cúpricos en la solución o para mantener su solubilidad en la solución alcalina.
Procedimiento de la prueba de Biuret
- Toma 3 tubos de ensayo limpios y secos.
- Agrega 1-2 ml de la solución de ensayo, albúmina de huevo y agua desionizada en los respectivos tubos de ensayo.
- Agrega 1-2 ml de reactivo de Biuret a todos los tubos de ensayo.
- Agitar bien y dejar reposar las mezclas durante 5 minutos.
- Observar si hay algún cambio de color.
Resultados de la prueba de Biuret
Observación |
Interpretación |
| No hay cambio de color, i.e., la solución permanece azul | Las proteínas están ausentes (prueba de biuret negativa) |
| La solución pasa de azul a morado intenso | Las proteínas están presentes (prueba de biuret positiva) |
Usos de la prueba de biuret
- Puede utilizarse para detectar la cantidad de proteínas en la orina.
- La reacción de Biuret con proteínas es aplicable a la determinación cuantitativa de la proteína total mediante análisis espectrofotométrico.
- Shrestha B (2002). Bioquímica práctica y biotecnología. Primera edición. 99933-665-1-X.
- Chemistry Learner (https://www.chemistrylearner.com/biuret-test.html).
- Satyanarayana U y Chakrapani U (2006). Biochemistry. Uppala Author-Publisher Interlink. Tercera edición. Página no. 43-67.
- https://study.com/academy/lesson/what-does-biuret-test-for-method-equation.html.
Fuentes de Internet
- 2% – https://www.slideshare.net/jammalavamsikrishna/amino-acids-71579203
- 2% – https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/biuret
- 2%. – https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0009898175903514
- 2% – https://peptidesciences.com/information/peptide-bonds/
- 10% – https://onlinesciencenotes.com/biuret-test-principle-requirements-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://quizlet.com/18722031/biology-chapter-5-flash-cards/
- 1% – https://microbiologyinfo.com/benedicts-test-principle-composition-preparation-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://brainly.in/question/716138
- 1% – http://amrita.olabs.edu.in/?sub=79&brch=17&sim=205&cnt=1
- <https://education.jlab.org/qa/charges_01.html