La extracción de ADN es un procedimiento de rutina utilizado para aislar el ADN del núcleo de las células.
Los científicos pueden comprar kits de extracción de ADN listos para usar. Estos kits ayudan a extraer el ADN de determinados tipos de células o tipos de muestras. Sin embargo, pueden ser caros para utilizarlos de forma rutinaria, por lo que muchos laboratorios tienen sus propios métodos para la extracción de ADN
¿Qué implica la extracción de ADN?
Paso 1. Romper las células para liberar el ADN
Las células de una muestra se separan unas de otras, a menudo por un medio físico como la trituración o el vortex, y se ponen en una solución que contiene sal. Los iones de sodio cargados positivamente en la sal ayudan a proteger los grupos de fosfato cargados negativamente que corren a lo largo de la columna vertebral del ADN.
A continuación se añade un detergente. El detergente rompe los lípidos de la membrana celular y los núcleos. El ADN se libera a medida que estas membranas se rompen.
Paso 2. Separar el ADN de las proteínas y otros restos celulares
Para obtener una muestra limpia de ADN, es necesario eliminar la mayor cantidad posible de restos celulares. Esto se puede hacer por una variedad de métodos. A menudo se añade una proteasa (enzima proteica) para degradar las proteínas asociadas al ADN y otras proteínas celulares. Alternativamente, algunos de los restos celulares se pueden eliminar filtrando la muestra.
Paso 3. Precipitar el ADN con un alcohol
Por último, se añade cuidadosamente alcohol helado (ya sea etanol o isopropanol) a la muestra de ADN. El ADN es soluble en agua pero insoluble en presencia de sal y alcohol. Agitando suavemente la capa de alcohol con una pipeta estéril, se hace visible un precipitado que puede extraerse. Si hay mucho ADN, puede verse un precipitado blanco y fibroso.
Paso 4. Limpieza del ADN
La muestra de ADN puede ahora purificarse más (limpiarse). A continuación, se resuspende en un tampón ligeramente alcalino y está lista para su uso.
Paso 5. Confirmar la presencia y la calidad del ADN
Para continuar con el trabajo de laboratorio, es importante conocer la concentración y la calidad del ADN.
Para determinar la concentración y la pureza del ADN en una muestra se pueden utilizar lecturas de densidad óptica tomadas por un espectrofotómetro. Alternativamente, la electroforesis en gel se puede utilizar para mostrar la presencia de ADN en su muestra y dar una indicación de su calidad.
¿Para qué se puede utilizar este ADN?
Una vez extraído, el ADN se puede utilizar para los análisis moleculares, incluyendo la PCR, la electroforesis, la secuenciación, las huellas dactilares y la clonación.