Letzte Aktualisierung am 5. Mai 2020 durch Sagar Aryal
Worauf weist der Biuret-Test hin?
Proteine sind eine komplexe Verbindung, die aus Tausenden von Aminosäuren besteht. Aminosäuren sind amphotere Elektrolyte mit Carboxyl- und Aminogruppen, die sich wie Säure und Base verhalten. Sie haben eine positive und eine negative Ladung, daher sind diese Ionen elektrisch neutral und wandern nicht im elektrischen Feld. Die beiden Aminosäuren werden mit Hilfe einer Bindung, die Peptidbindung genannt wird, miteinander verknüpft und es entsteht ein Dipeptid. Die Bindung wird zwischen der α-Aminogruppe der einen Aminosäure und der α-Carboxylgruppe der anderen Aminosäure unter Entfernung eines Wassermoleküls gebildet. Die Bildung der Peptidbindung wird als Kondensationsreaktion bezeichnet. In ähnlicher Weise werden drei Aminosäuren, die durch zwei Peptidbindungen miteinander verbunden sind, als Tripeptid bezeichnet, und wenn sich die Kette verlängert, wird sie als Polypeptid bezeichnet. Biuret ist eine Verbindung, die durch Erhitzen von Harnstoff auf 1800 gebildet wird, was zu einer Kondensation von 2 Molekülen Harnstoff führt. Die Peptidbindungen in Biuret führen zu einem positiven Testergebnis, weshalb das Reagenz auch so genannt wird. Er gilt als allgemeiner Test für Verbindungen (Proteine und Peptide) mit zwei oder mehr Peptidbindungen (CO-NH).
Ziele
- Das Protein in der gegebenen Lösung nachzuweisen.
- Das Vorhandensein der Peptidbindung nachzuweisen.
Biuret-Test-Prinzip (Wie funktioniert der Biuret-Test?)
Der Biuret-Test ist ein chemischer Test, der zur Bestimmung des Vorhandenseins einer Peptidbindung in einer Substanz verwendet wird. Er basiert auf der Biuret-Reaktion, bei der eine Peptidstruktur, die mindestens zwei Peptidbindungen enthält, eine violette Farbe erzeugt, wenn sie mit alkalischem Kupfersulfat behandelt wird. In Gegenwart einer alkalischen Lösung kann das blau gefärbte Kupfer-II-Ion einen Komplex mit den Peptidbindungen bilden, da das Peptid ungeteilte Elektronenpaare im Stickstoff und Sauerstoff des Wassers besitzt. Der farbige Koordinationskomplex wird zwischen Cu2+-Ion und Carbonyl-Sauerstoff (>C=O) und Amid-Stickstoff (=NH) der Peptidbindung gebildet. Sobald sich dieser Komplex gebildet hat, färbt sich die Lösung von blau nach violett. Je tiefer die violette Farbe, desto höher ist die Anzahl der Peptid-Kupfer-Komplexe. Die Reaktion findet in jeder Verbindung statt, die mindestens zwei H2N-C, H2N-CH2-, H2N-CS- oder ähnliche Gruppen enthält, die direkt oder über ein Kohlenstoff- oder Stickstoffatom miteinander verbunden sind. Ein Kupferion ist wahrscheinlich mit 6 nahegelegenen Peptidbindungen durch koordinative Bindungen verbunden. Die Intensität der Farbe ist direkt proportional zur Anzahl der Peptidbindungen, die im reagierenden Proteinmolekül vorhanden sind, und auch zur Anzahl der im Reaktionssystem vorhandenen Proteinmoleküle.
Das Biuret-Reagenz ist eine Lösung, die aus Natriumhydroxid (NaOH) oder Kaliumhydroxid (KOH), hydratisiertem Kupfer(II)-Sulfat und Kaliumnatriumtartrat besteht. Natriumhydroxid und Kaliumhydroxid stellen das alkalische Medium zur Verfügung und Kaliumnatriumtartrat wird zugegeben, um die Kupferionen in der Lösung zu chelatisieren und damit zu stabilisieren bzw. um ihre Löslichkeit in der alkalischen Lösung zu erhalten.
Biuret-Testdurchführung
- Nehmen Sie 3 saubere und trockene Reagenzgläser.
- Geben Sie 1-2 ml der Testlösung, Eieralbumin und entionisiertes Wasser in die jeweiligen Reagenzgläser.
- Geben Sie 1-2 ml Biuret-Reagenz in alle Reagenzgläser.
- Schütteln Sie gut und lassen Sie die Mischungen 5 Minuten lang stehen.
- Beobachten Sie auf Farbveränderungen.
Biuret-Test Ergebnisse
Beobachtung |
Interpretation |
| Keine Farbänderung, i.e., die Lösung bleibt blau | Proteine sind nicht vorhanden (negativer Biuret-Test) |
| Die Lösung verfärbt sich von blau nach dunkelviolett | Proteine sind vorhanden (positiver Biuret-Test) |
Biuret-Test Verwendung
- Es kann verwendet werden, um die Menge an Protein im Urin zu bestimmen.
- Die Biuret-Reaktion mit Protein ist für die quantitative Bestimmung des Gesamtproteins durch spektrophotometrische Analyse geeignet.
- Shrestha B (2002). Praktische Biochemie und Biotechnologie. 1. Auflage. 99933-665-1-X.
- Chemistry Learner (https://www.chemistrylearner.com/biuret-test.html).
- Satyanarayana U und Chakrapani U (2006). Biochemistry. Uppala Author-Publisher Interlink. 3. Auflage. Page no. 43-67.
- https://study.com/academy/lesson/what-does-biuret-test-for-method-equation.html.
Internet-Quellen
- 2% – https://www.slideshare.net/jammalavamsikrishna/amino-acids-71579203
- 2% – https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/biuret
- 2% – https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0009898175903514
- 2% – https://peptidesciences.com/information/peptide-bonds/
- 10% – https://onlinesciencenotes.com/biuret-test-principle-requirements-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://quizlet.com/18722031/biology-chapter-5-flash-cards/
- 1% – https://microbiologyinfo.com/benedicts-test-principle-composition-preparation-procedure-and-result-interpretation/
- 1% – https://brainly.in/question/716138
- 1% – http://amrita.olabs.edu.in/?sub=79&brch=17&sim=205&cnt=1
- <https://education.jlab.org/qa/charges_01.html